铁调素检测试剂介绍:
通用名称:铁调素-25检测试剂盒(酶联免疫法)
英文名称:Hepcidin 25 bioactive ELISA
产品规格:96T
产品货号:EIA 5258
产品品牌:德国DRG
检测方法:ELISA
供应商家:深圳市AG九游国际生物工程有限公司
铁调素检测试剂预期用途:
可用于血清、肝素血浆中铁调素-25的体外定量检测(仅用于科研使用。)
铁调素介绍:
铁调素是人体内的一种铁平衡调节多肽。活性多肽铁调素-25主要是在肝脏中产生,通过蛋白质溶解切割前铁调素的C-端的25个氨基酸所产生的。随后,N-端的铁调素-25转化为更小的多肽(大约20~24个氨基酸),这些多肽活性更低并且在尿液中累积。
近年来,随着铁调节肽一铁调素(hepcidin)的发现,人们对慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)贫血的病理生理机制的认识显著提高。在CKD患者中,铁调素的清除减少及慢性炎症状态的存在使得血清铁调素水平升高。对于铁调素多种影响因子及信号通路的研究发现为治疗慢性肾性贫血的药物研究开辟了新的方向。
检测原理:
采用的是竞争酶联免疫法微孔板上包被了能与生物活性铁调素-25分子抗原位点特异性结合的单克隆抗体;样本中的内源性铁调素与生物素化铁调素竞争结合包被抗体,温育后洗去未结合的部分;加入链霉亲和素-过氧化物酶复合物温育,洗涤;加入底物液,短时间的孵育,发生颜色变化反应;样本中铁调素浓度与颜色的强度成反比。
组成成分:
注意:若有需要可额外订购稀释样本的分析缓冲液
名称 | 数量 | 成分 |
微孔板 | 96孔 | 可拆,包被了抗铁调素-25抗体(单克隆) |
标准品(0-5) | 6×0.2ml | 冻干品 浓度:0、2、6.5、25、45、80ng/ml 含无汞防腐剂 |
高低质控 | 2×0.2ml | 冻干品 具体质控值及范围见QC质控单 |
分析缓冲液 | 1×14ml | 即用 含无汞防腐剂 |
酶复合物 | 1×14ml | 即用 |
酶联物 | 1×7ml | 即用 含HRP标记的链霉亲和素 |
洗涤浓缩液 | 1×30ml | 40倍浓缩 |
底物液 | 1×14ml | 即用TMB |
终止液 | 1×14ml | 即用0.5M硫酸,避免接触终止液,会腐蚀和烧伤皮肤 |
实验所需材料(未提供)
●酶标仪(450±10nm)
●校准的变量移液器
●吸水纸
●去离子水或双蒸水
●计时器
●半对数坐标纸或数据处理软件
储存条件:
未开封的试剂在2-8℃下可保存至有效期,不要使用过期的试剂,开封的试剂和微孔板必须贮存于2-8℃,密封袋一旦打开后,应立即密封好,开封的试剂盒若按上述方法保存可保持2个月活性。
检测步骤:
每次实验都应建立标准曲线
1、将实验所需的板条固定于板架上
2、每孔加100ul的分析缓冲液
3、加20ul的标准品、质控品和样本于相应的微孔内
4、每孔加入50ul的酶复合物,充分混匀10秒钟
5、室温下,温育60分钟(300~700rpm)
6、弃去孔内反应液,每孔加300ul的洗涤液洗板4次(手动)或400ul洗板3次(洗板机)
7、每孔加100ul的酶联物
8、室温下30分钟(无需振摇)
9、重复步骤6
10、每孔加100ul的底物液
11、室温下温育20分钟
12、每孔加100ul的终止液
13、加入终止液10分钟内,在酶标仪450±10nm处检测吸收值
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