登革热IgG检测试剂盒(酶联免疫法)
登革热IgG检测试剂盒产品详细
中文名称 | 登革热IgG检测试剂盒(酶联免疫法) |
英文名称 | Dengue virus IgG ELISA |
产品货号 | RE58671 |
产品规格 | 96T |
检测样本 | 血清、血浆 |
适应物种 | 人 |
预期用途 | 可用于人血清、血浆中抗登革热病毒IgG抗体的定性检测 |
产品品牌 | 德国IBL |
供应商家 | 深圳市AG九游国际生物工程有限公司 |
登革热IgG ELISA试剂盒预期用途
登革热IgG ELISA试剂盒可用于人血清、血浆中抗登革热病毒IgG抗体的定性检测。
登革热IgG检测试剂盒组成成分
名称 | 数量 | 成分 |
微孔板 | 12×8可拆板条 | 包被有登革热2型抗原,真空密封于铝铂金属袋中 |
样品稀释液 | 1瓶x100ml | 内含100ml样品稀释用缓冲液,pH2±0.2,液体为黄色,待用,白盖 |
终止液 | 1瓶x15ml | 内含15ml硫酸,0.2mol/l;待用,红盖 |
洗涤液20×浓缩 | 1瓶x50ml | 含20倍浓缩的样品洗涤液,pH7.2±0.2,白盖 |
酶联物 | 1瓶x20ml | HRP标记的兔抗人IgG,蓝色,待用,黑盖。 |
底物液 | 1瓶x15ml | TMB,待用,黄盖。 |
阳性质控 | 1瓶x2ml | 黄色,待用,红盖 |
临界质控 | 1瓶x3ml | 黄色,待用,绿盖 |
阴性质控 | 1瓶,2ml | 黄色,待用,蓝盖 |
登革热IgG检测试剂盒检测原理
抗登革热病毒IgG抗体的定性酶免检测利用的ELISA技术。微孔板上预先包被了结合样品相关抗体的登革热病毒2型抗原。洗板除去未结合的样品物质后,加入辣根过氧酶标记的抗人IgG酶联物。这一酶联物可与捕获到的登革热病毒特异性抗体结合。加入能产生蓝色反应产物的TMB底物液后,如果显示蓝色则可知已形成免疫复合物。所显示颜色的强度与样品中登革热病毒特异性IgG抗体的量成正比。加入硫酸以终止反应,以便产生黄色的终点颜色。用一酶标仪在450m处读取OD值。
登革热IgG检测所需材料(试剂盒内未提供)
★ | 可在450/620nm处读数的酶标仪 |
★ | 37℃恒温箱 |
★ | 自动或半自动洗板机 |
★ | 取样吸头(10µl和100µl) |
★ | 旋涡混合器 |
★ | 去离子水或双蒸水 |
★ | 试管 |
★ | 计时器 |
登革热IgG检测试剂盒检测步骤
实验开始之前仔细阅读操作步骤,严格遵守操作步骤才可以获得可靠的实验结果。如果这实验是在ELISA自动系统上进行,为了避免洗板的影响,我建议在洗板步骤时,洗板3次改成洗板5次,洗涤液从300µl增加到350µl。实验开始之前,应当在试剂盒提供的结果单上标记好所有的样品和质控品。取适当数量的板条置于板架上。
请至少做以下几个孔:
1孔(例A1)做空白对照孔
1孔(例B1)做阴性质控
2孔(例C1+ D1)做临界质控
1孔(例E1)做阳性质控
我们建议您将质控和病人样品做双份检测。照说明书给出的实验步骤进行操作,并避免不同步骤之间的时间隔无明显差别。加每一质控品和样品时都应当用新的取样吸头。把恒温箱调至37 ± 1℃
1. | 控品和已稀释好的样品分别100µl加入到相应的微孔中,留下A1做空白对照孔 |
2. | 盖板 |
3. | 37±1℃下温育1h±5min |
4. | 温育后,移去粘性金属板,弃取孔内反应液,用300µl洗涤液洗板3次。避免反应孔中的液体溅出。每次洗板间的浸润时间都应大于5秒。后在吸水纸上拍干。 注意:洗板步骤很重要,洗板不充分将可能导致结果不精确或错误的OD值。 |
5. | 除空白孔外,在每一微孔中都加入100µl登革热抗IgG酶标物,盖板。 |
6. | 室温下温育30,避免太阳直射 |
7. | 重复步骤4 |
8. | 在每一微孔中加入100µlTMB底物液 |
9. | 室温下(20-25℃)避光温育15min |
10. | 按加TMB底物液的顺序和速度在每一微孔中加入100µl终止液。 温育之后,包被板内试剂的颜色由蓝色变为黄色 注意:高阳性的病人样品会引起染色剂沉淀。这些沉淀物会影响OD值的读取。例如:我们建议按1:1的比例用生理盐水预先稀释样品。然后按1:100的比例用稀释液稀释样品,并将结果乘以2。 |
11. | 加终止液后30min之内在450/620nm处读取OD值。 |
登革热IgG检测试剂盒样本要求
样本采集后(保存在2-8℃)应该在5小时内用于检测,否则应该保存在-20~-70℃。避免反复冻融,不推荐使用灭活的样本。
样品稀释:样品使用样品稀释液以1:101的比例进行稀释。
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