军团菌抗体ELISA检测试剂盒
(美国DRG*:货号,EIA2814;规格,96T)
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1、适用范围
作为一种辅助手段用于定性检测人血清中军团菌总抗,属于体外诊断试剂。在美国仅用于科研。
2、实验原理
微孔板中包被着激活的军团菌抗原,实验过程包含三步
- 待测血清在包被板中的反应。血清中特异性抗体可与包被板中的抗 原结合,洗板除去未结合样品。
- 加入酶联羊抗人IgA/M/G,酶联物可与上步中结合到包被板的抗体反应,洗板。
- 底物液显色反应,通过颜色变化,可判断其抗体的含量。
3、试剂组成
名称 | 规格 |
微孔条 | 包被军团菌抗原(1-6组) 12 X 8孔 |
酶联物 | 1×15ml/瓶标记有HRP羊抗人军团菌IgG/M/A抗体白色盖子 |
阳性质控 | 1×0.35ml/瓶 红色盖子 |
标准品 | 1×0.5ml/瓶 蓝色盖子 |
阴性质控 | 1×0.35ml/瓶 绿色盖子 |
样品稀释液 | 1×30ml/瓶 |
底物显色液 | 1×15ml/瓶含TMB |
浓缩洗涤液(10X) | 1×100ml/瓶 |
终止液 | 1×15ml/瓶1M的硫酸 |
4、试剂储存保存于2-8℃,稀释后的洗涤液可在室温保存一周
5、样品收集和准备静脉穿刺取血,避免交叉感染,禁止使用溶血,污染血液样品。血液样品在室温下不得超过8小时,2-8℃保存不得超过48小时,如需保存更长时间需在-20℃或者更低的温度下冻存。
6、实验所需材料仪器但本试剂盒未提供酶标仪
微量移液管10ul和200ul
多通道移液器(50-200ul)
去离子水
塑料洗瓶
加样枪头
量筒
纸巾
7、实验步骤(1)、将试剂盒内各成份平衡至室温。
(2)、确定所需的微孔条将其固定在板架上。(1个空白孔,1个阴性质控孔,3个标准品孔,1个阳性质控孔)
(3)、按照1:21对样品,阴性质控,标准,阳性质控进行稀释(10ml血清+200ml的样品稀释液)
(4)、加入100ul样品稀释液于A1孔作为空白孔,每孔分别加入100ul稀释后
的质控,标准及样品。
(6)、室温(20-25℃)反应25±5分钟
(7)、洗板5次
(8)、每孔加入100ul的酶联物
(9)、室温(20-25℃)反应25±5分钟
(10)、洗板5次
(11)、每孔加入100ul的底物液
(12)、室温下反应10-15分钟
(13)、每孔加入50ul终止液
(14)、30分钟内酶标仪读数
观察结果,或者在450nm/620-650nm处读数
注意:洗涤时要反复洗涤五次8、结果说明CUTOFF OD值=参比品OD x 相关因子(CF)
CF值在每个试剂盒上注明。
阴性样品:样本OD/CUTOFF OD ≤ 0.90
灰色区域:0.91<样本OD/CUTOFF OD<1.09
阳性样品:样本OD/CUTOFF OD≥ 1.10
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