C反应蛋白检测试剂盒（酶联免疫法）
（德国DRG*货号EIA4584 规格96T）
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实验原理
包被板上包被有抗CRP抗体，与稀释标准品和样本一起孵育，孵育中，CRP特异性结合包被抗体，洗板除去未结合的血清蛋白，抗原-抗体混合物与过氧化物酶酶联物抗体反应，洗涤除去为结合酶联物，加入含有TMB和过氧化氢的着色液孵育，与微孔板结合的免疫复合物的量与颜色强度成正比，加0.5M硫酸终止反应，450nm处检测吸光值
以标准品浓度和OD值做标准曲线，样本CRP浓度可直接从标准曲线上得出
此试剂盒在美国仅用于科研
 
试剂盒组成
 

1. 包被板，96孔，包被有抗人CRP单克隆抗体
2. 标准品，5瓶，0.2ml，含1/10的预稀释标准品，浓度为：0；0.4；1；5；10ug/ml
3. 酶联物，1瓶，12ml，含过氧化物标记的抗人CRP单抗；抗菌剂和惰性红色染料
4. 样本稀释液，1瓶，40ml，5X浓缩，含0.09%NaN 3和抗菌剂，惰性绿色染料
5. 洗涤液，1瓶，50ml，20X浓缩，含磷酸缓冲洗涤液
6. 底物液，1瓶，15ml，含过氧化氢和TMB
7. 终止液，1瓶，12ml，0.5M硫酸

 
实验所需材料但试剂盒未提供
 

1. 移液器和枪头
2. 标准容积的洁净玻璃器皿
3. 样本稀释用的洁净玻璃试管
4. 酶标仪（450nm）

 
贮存条件
2-8℃
 

1. 将微孔板条贮存于原装含干燥剂的密封袋内，直至全部用完
2. 不要使用过期的试剂

 
样本采集与准备
此实验可用到血清和血浆
采样后立即分离出血清，避免使用溶血，脂血或黄疸血，可能回导致错误结果
将血清转移干净试管
样本可在2-8℃下贮存几天，或冻存更长时间，避免反复冻融
 
一般注意事项
1使用一次性加样枪头加样，避免交叉污染．
2实验前，将所有试剂平衡至室温．试剂混匀时避免产生气泡．
3一旦实验开始，所有实验步骤应中断进行
4吸光值是孵育时间和温度的一条函数．所以应控制好实验加样，建议每次只做20份样品和一组标准品，作双份检测．
 
试剂准备
 
洗涤液：用去离子水稀释50ml的洗涤浓缩液至总体积为1000ml，稀释洗涤液可在2-8℃下至少放置1个月
 
过高温度可能回引起浓缩洗涤液出现浑浊，其并不会有影响，稀释后就会变澄清
 
样本稀释液：用去离子水稀释40ml的样本稀释浓缩液至总体积为200ml，2-8℃下可放置3个月或更长时间，始终保持澄清
 
实验步骤
 

1. 10倍预稀释标准品血清按如下方法进行1:100稀释：

10ul的标准品至稀释试管内，加990ul的已稀释的样本稀释液，混合
 

1. 样本按1:1000分两步进行稀释：10ul的样本血清与990ul的已稀释的样本稀释液，混合；加450ul的已稀释的样本稀释液与50ul的100X的预稀释样本，混合（注意：稀释样本贮存不要超过8小时）
2. 将100ul的稀释标准品和样本加入相应微孔内
3. 室温下盖板孵育30±2min
4. 洗涤缓冲液洗板3次

可选用合适的自动洗板机洗板，或手动洗板：迅速倒到孔内反应液，再注入稀释洗涤液．第三次洗板时，让稀释洗涤液在微孔内停留2－3分钟．每次洗板都要换新的稀释洗涤液．zui后倒掉所有溶液并在吸水纸上拍干，去除残留液滴．
 

1. 每孔加100ul的酶联物，盖板室温下孵育30±2min
2. 重复步骤5）洗板
3. 每孔加100ul的底物液
4. 避光，室温下孵育10±2min
5. 每孔加50ul的终止液
6. 加入终止液后，30min内450nm处酶标仪上读数

 
结果分析与说明
以标准品的吸光度均值与相应的浓度建立*标准曲线．
患者样品的浓度通过测的吸光值直接从标准曲线计算出浓度．
根据经验或可利用的计算机方法，也可用其它数据简化分析．
zui低检测浓度
zui低检测浓度约为0.02 µg/ml.
 
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