C反应蛋白超敏检测ELISA试剂盒
德国DRG进口原装货号：EIA3954 规格96T
德国DRG中国*代理商深圳AG九游国际生物工程有限公司

用于体外诊断用
存储于2 °C – 8 °C.
 
产品名
C反应蛋白超敏检测试剂盒（酶联免疫法）
 
预期用途
此超敏CRP ELISA检测试剂盒能用于人血清中C反应蛋白的定量检测．检测C反应蛋白可用于感染，组织损伤，炎症和相关疾病的辅助检测．
 
简介
C反应蛋白于1930年由Tilet和Francis在肺炎患者血清中鉴别出来，因其能结合和沉淀肺炎球菌C多糖而得名．它是一种分子量约为110,000－140，000道尔顿，由5个相同亚单位（由非共价键结合成的循环五聚物）组成的α球蛋白．C反应蛋白在肝脏中合成，正常情况下血清和血浆含量很少，浓度约为0.3 mg/dl．它具有广泛的生理学意义，但与其它免疫球蛋白具有几种相似的功理，主要表现为机体防御．
C反应蛋白是种急性期蛋白，在多种疾病的非特异性反应过程中（包括革兰氏阳性和革兰氏阴性微生物感染，风湿性关节炎，腹脓肿，胆管发炎等），患者血清和血浆中的含量水平都会剧增．在格林-巴利综合征，多发性硬化，特定的病毒感染，肺结核，急性传染性肝炎，多种神经和炎症疾病，灼伤和外科术后的病人体内也能观察到高浓度的C反应蛋白．
尽管检测血清中C反应蛋白上升的浓度不能作为特定疾病的指标，但对于多种炎症的病发研究是很有意义的．急性组织损伤后，在24－48小时内血清或血浆中C反应蛋白的浓度就迅速上升，急性期间达到（大约上升1000倍），创伤或炎症治疗后，其浓度立即下降．人血清或血浆中C反应蛋白的浓度，在降至正常水平前会持续几天的上升．检测C反应蛋白可作为炎症病变过程的标记物，甚至比红细胞沉降速度这种指标更可靠和灵敏．因为红细胞沉降速度会受到非炎症进程机体的生理变化的影响．常见检测C反应蛋白的方法包括：乳胶凝集试验，比浊法，放射免疫扩散法．但这些方法的灵敏度都很低，而ELISA方法的灵敏度和特异性更高．
由于上升浓度的C反应蛋白往往与病理改变存在紧密，故也可作为诊断，治疗，炎症监测和相关病症的有效辅助工具．此外，通过高灵敏度的方法检测C 反应蛋白也可增强其它心肌标记物（如肌红蛋白，肌钙蛋白I和T）的预测价值，有利于心血管和外围血管疾病的风险评估．由于C反应蛋白值的上升为非特异性，所以需结合患者病历评估与先前的检测值作对比进行分析．
 
 
实验原理
超敏CRP检测试剂盒基于酶免法原理，试验中采用了抗CRP的特异性单克隆抗体，包被板上包被了抗CRP抗体鼠单抗，，HRP标记的抗CRP抗体羊抗，试验样本与这两个抗体反应，样本中CRP分子在固相抗体和酶联物抗体之间，室温下45min孵育过后，洗板，除去未结合的标记抗体，TMB底物液加入，孵育20min，变成蓝色，以1N HCL终止颜色反应，变成黄色
样本中的CRP浓度与颜色强度成正比，450nm处检测吸光值
试剂盒组成
 

1. 包被板，96孔，包被有抗CRP小鼠单抗
2. 标准品，1.0ml/支，浓度分别为：0；0.005；0.010；0.025；0.050；0.100mg/L，，　　　　含防腐剂，即用
3. 样本稀释液，50ml/支，含磷酸缓冲液-BSA溶液，含防腐剂
4. 酶联物，12ml/支，含HRP标记的抗CRP羊抗，含防腐剂
5. TMB底物液，11ml/瓶，TMB
6. 终止液，11ml/瓶，1N 盐酸

实验所需器材但试剂盒未提供
 

1. 移液器：5ul；10ul；50ul；100ul；1.0ml
2. 一次性枪头
3. 酶标仪
4. 混合器或相关仪器
5. 吸水纸
6. 坐标纸

贮存条件
 

1. 未开封的试剂盒可在2-8℃下保存至有效期
2. 保持微孔板保存于含有干燥剂的密封袋内，尽可能避免接触潮湿的空气

试剂准备
 

1. 实验前将所有试剂平衡至室温（18 °C – 25 °C）
2. 实验前病人血清应稀释100倍，如5ul的血清+495ul的样本稀释液；

标准品不需要稀释
 

1. 稀释后的样本CRP浓度仍超过了10mg/L时，应进一步进行稀释（10倍）（如10ul 已100倍稀释的样本+90ul样本稀释液）

样本采集与准备
 

1. 此试验需使用血清样本
2. 标准静脉采血技术采集样本，采集后60min内分离出血清
3. 24小时内样本不使用的话，需贮存于-20℃或更低，可保存6个月
4. 避免使用溶血（鲜红色），脂血（乳白色）或浑浊样本（离心后）
5. 样本不能反复冻融，不要将样本贮存于无霜冷冻机内，冻存的样本和浑浊样本或含有其他微粒物质的样本，在使用前都需要进行离心

操作注意事项
 

1. 加样建议（单通道或多通道）：所有标准品，样本和质控加样应在3min之内完成
2. 所有标准品，样本和质控都做双孔检测
3. 加入终止液后15min内读数

实验步骤
 

1. 实验前病人样本和质控稀释100倍，见“试剂准备”；不要稀释标准品
2. 将实验所需包被板固定于板架上
3. 将10ul的标准品，稀释的样本，稀释的质控加于相应孔内
4. 每孔加100ul的CRP酶联物
5. 充分混合30秒，充分混合相当重要
6. 室温下（18-25℃）孵育45min
7. 迅速弃去反应液，用去离子水或双蒸水洗板5次，不要使用自来水；
8. 吸水纸上拍干，去除残留液滴
9. 每孔加100ul的TMB底物液，轻轻混合5秒
10. 室温下孵育20min
11. 每孔加终止液100ul
12. 轻轻混合30秒，确保蓝色溶液全转变为黄色
13. 15min内酶标仪上读数（450nm）

结果计算
 

1. 计算各标准品，样本的平均OD值
2. 以标准品的浓度为X轴，OD值为Y值，绘制标准曲线
3. 样本浓度值可从标准曲线上直接得到；也可使用相关数据处理软件得到实验结果
4. 所得样本浓度值还需乘以稀释因子100，而得到zui终结果
5. 若样本浓度高于10mg/L，需进一步稀释（10倍），所得结果需乘以1000
6. 注意：病人样本CRP浓度低于0.1mg/L的记录为＜0.1mg/LCRP

标准曲线示范
 
以下为以CRP的浓度为X轴，相应的吸光值为Y轴的典型标准曲线．
提示：此标准曲线仅供演示说明用，不能用于未知样品的计算．每个实验室在每次实验都应建立自已的数据和标准曲线．

期望值
建议每个实验室都应在健康人群的基础上建立自己的正常值范围；以下是出版的文献中提及的健康人群的CRP值
正常血清：0.01—0.35mg/L
成人血清：0.068—8.2mg/L
 
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