美国DRG*，货号：EIA-1612

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DRG公司的雌三醇酶免试剂盒可用于孕妇中孕期血清游离雌三醇的体外检测。

雌三醇（E3）是由孕期胎盘生成的主要雌激素，游离E3通过胎盘进入母亲的血循环，在那里很快降解为葡糖苷酸和硫酸盐衍生物以便于排泄。雌三醇在母亲血液中的半衰期只有20-30分钟，因此可以方便快捷的评价zui近的胎儿状态。血浆雌三醇水平稳定地升高且在孕晚期（28-40周）升高得zui快。胎盘雌三醇的产生突然减少将导致母亲血清的游离雌三醇快速降低，测定游离雌三醇比测定血清总E3或尿中E3有许多可能的优势，游离雌三醇水平与母亲的肝肾功能无关，也不受某些抗体的影响，因此游离雌三醇更准确地反映糖尿病孕妇胎儿的结果。因为游离雌三醇不会发生任何水解，所以我们可以更快得到实验结果。DRG公司的E3酶免试剂盒是以一种非同位素的方法检测人血清中的游离E3。这种方法利用了一种高特异性的E3抗体和酶联分析物。zui后用酶标仪检测显色产物。此试剂盒有效期长，无放射性同位素的影响，而且有注册证明，因此它广泛适用于各大小实验室。

    DRG公司的雌三醇（游离的）酶免试剂盒是一种基于竞争法原理的固相酶免吸附实验（ELISA）。在此实验中，雌三醇用辣根过氧酶标记。将含雌三醇的血清与辣根过氧酶标记的雌三醇混合并加入到包被板的微孔中。雌三醇的抗体已预先包被在包被板的微孔上。温育一个小时后，用洗涤液洗去未结合的辣根过氧酶标记的雌三醇和样品雌三醇。再向微孔中加入底物液，温育之后再加入能产生有色产物的终止液，之后在酶标仪上读取OD值。

注：储存于2-8℃的环境下。

1）      兔抗雌三醇抗体包被的包被板，12 ×8孔，微孔中包被了雌三醇抗体。

2）      雌三醇血清标准，共6支（标准品0-5）， 1ml/支，（0；0.3；1.2； 4；15；40ng/ml），每支都装有含雌三醇的人血清、盐缓冲液和防腐剂。注意：将其当作乙肝病毒和HIV病毒的潜在传染原进行处理。标准品的原材料用*试剂进行检测，结果发现与乙肝病毒表面抗原和HIV间不反应。然而，目前没有任何方法能保证来源于人的产品不含有上述病毒。

3）      雌三醇酶联结物，14m，内装有辣根过氧化物酶标记的雌三醇。

4）      TMB底物液，14ml。

5）      终止液，14ml，H2SO4.。

6）      浓缩洗涤液（40X），30ml。

注意：试剂盒中可能含有像人血清一样需进行特殊处理的材料。在处理剩余材料前，注意查看当地关于处理医学垃圾的法规，以确保处理方法及结果能满足当地法律规范的要求。

1）标准移液器

2）可在450nm处读数的酶标仪

3）吸水纸

1）  把所有的血液和血清当作潜在的乙肝病毒和HIV传染源进行处理。

2）  在E3的检测过程中需要用血清。

3）  采集到血液后立即分离血清，储存时用盖子盖好。

4）  样品可在2-8℃的环境下存放4天，如果想将存放时间超过4天，则必须冻存。

5）  样品要避免反复冻融。

6）  实验开始前，必须将冻存的血清充分解冻并混合均匀。

7）  不要使用含脂量很高的血清。（实验开始前必须试图检测下血清的含脂量）。

8）  含一定量脂血、溶血和黄疸血的样品一般不会影响实验结果。

用900ml蒸馏水稀释浓缩洗涤液，贮存于2-8℃的环境下时，在有效期内稳定。

1）      将10μl雌三醇标准品加入到相应微孔中。

2）      将质控品和病人血清分别10 μl加入到相应微孔中。

3）      在每一微孔中加入100μl酶标记的雌三醇。

4）      10秒钟充分混匀。

5）      室温温育60分钟。

6）      弃去孔内反应液，每孔用400μL洗涤液洗板4次，并在吸水纸上拍干。

7）      在每一微孔中加入100μl TMB底物液。

8）      室温温育30分钟。

9）      在每一微孔中加入100μl终止液。

10）  在450±10nm处读取OD值。

1）  加试剂时，保证每孔的加样顺序一致，这可以保证所有的孔都有相同的温育时间。每一加样步骤都应无中断。

2）  为了避免液体残留在孔壁上，请将试剂直接加入到微孔底部。

3）  为了能得到理想的实验结果，我们检测标准品和样品都做双份检测。

4）  实验所用的移液器包括多道或自动移液器的CV（变异系数）都必须低于1%。

1）在半对数坐标纸上，以E3标准品的OD值为Y轴，其浓度为X轴作一条标准曲线。

2）在点之间画一条的曲线

3）在标准曲线上，用质控品和未知血清样品的OD值标绘出其相应的浓度，并记录下结果

DRG公司的MAT3000酶标仪及相应的线形回归曲线可用计算机辅助的四参数和三次回归曲线来直接读取OD  值。

试剂盒的使用者必须在实验开始前阅读并充分理解说明书。严格遵守实验操作才可以获得可靠的实验结果。处理、储存、添加试剂时要特别小心，这对于实验结果的性和精密性具有重要意义。病人样品的不正当处理可能会导致错误的实验结果。实验开始前，请将冻融的样品充分混合均匀。请勿使用陈旧的和处理错误的血清样品。样品降解及反复冻融都会导致错误的实验结果。病人样品应当尽早检测。严重溶血、脂血或黄疸血的样品会使得实验结果的精密度和度都比较低。使用这种样品所获得的实验结果应当小心处理。实验这应当使用质量更好的样品来确定结果。

1）不同试剂盒或不同批次的试剂请勿混合或交换。

2）请勿使用过期试剂。（有效期印在试剂瓶上）

3）每个实验室都应当在正常范围、低水平范围和高水平范围内，用质控确定自己实验室的精密读和度标准。

4）为了保证不同批次试剂盒结果的可靠性和连续性，绘图方式和统计方法都应不断更新。

人体体液E3的检测常被用来监测胎儿是否生长正常，特别是检测那些高危产妇。血浆E3的浓度在妊娠20周内会逐渐增加，在晚孕期会增加得更快。因为血清E3的正常与不正常范围相当宽而且不稳定，所以单独检测E3没有很大的临床意义。为了确定个体E3的趋向，我们应当经常监测病人的情况。晚孕期血清E3浓度继续较低或突然并持续降低，表明胎儿窘迫或子宫死胎的可能性很高。如果出现这种情况，应当用相应的方法检测胎儿的情况如何。血清游离E3的水平殷钢结果其它临床方法或诊断方法（羊膜穿刺和超声波）来说明其临床意义。在下列病人的血清中也可能检测到不正常的E3水平：注射了抗生素或皮质甾体类激素的病人和母体肝功能削弱的病人。

 

 

 

 

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