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HPL人胎盘泌乳素ELISA试剂盒
HPL人胎盘泌乳素ELISA试剂盒
美国DRG*，货号：EIA1283
美国DRG中国*代理商“深圳AG九游国际生物工程有限公司”竭诚为您服务
1、 前言说明
DRG公司的HPL（人胎盘泌乳素）ELISA试剂盒可用于人血清中HPL的定量检测。此试剂盒仅供体外诊断用。
HPL的是生理学功能到目前为止还未确定，但它很大程度上与人生长激素一样是孕期胎儿胎盘和生理变化的调节者，这表明母体血清HPL的水平可以放映胎盘的功能。
在（胎儿）宫内死亡、婴儿分娩疼痛和生产时胎儿窒息的病例中，其人胎盘泌乳素（HPL）水平会降低。如果HPL的低水平重复出现，那么这种相关性就特别明显，它表明子宫长期处于这种状态就会使胎儿受到损害。如果孕期正常，母体HPL水平降低（的情况）一般不会出现。在单胎妊娠中，如果HPL水平升高则意味着*的妊娠结果。然而高水平的HPL也有可能意味着婴儿潜在某些特定疾病，如糖尿病婴儿先天肥胖性巨体、新生儿溶血症和胎儿水肿病的重要病理学原因。
2、实验原理
   DRG公司的HPL酶免实验是一种基于夹心法原理的固相酶联免疫吸附实验（ELISA）。反应板上的微检测孔包被有能结合HPL分子上*抗原位点的单克隆抗体。一份含有内源性HPL的病人样本在包被孔中与酶联物进行孵育，该酶联物是一种联结有辣根过氧化物酶的抗HPL抗血清。孵育后，用洗涤液洗去未结合的酶联物。辣根过氧化物酶的结合总量与样本中HPL的浓度成正相关。加入底物溶液后，显出的颜色强度与病人样品中HPL的浓度成正比。
3、试剂
1）       微孔反应板，可拆，12×8（96孔），包被有抗HPL的单克隆抗体。
2）       标准品（标准品1-4），4支，0.5ml，待用。浓度：1.25；5.0；10.0；20mg/L，转换系数：1mg/L=1mIU/L。内含0.3%的Proclin防腐剂。
3）       零标准品（也用做样品稀释液），1支，90ml，待用，0mg/L。内含0.3%的Proclin防腐剂。
4）       酶联物，1支，11ml，联结有辣根过氧化物酶的抗HPL 抗体。内含0.3%的Proclin防腐剂。
5）       底物溶液，1支，11ml，待用，TMB（四甲基联苯胺）
6）       终止液，1支，6ml ，内含0.5M的H2SO4。请不要接触终止液，以免刺激皮肤和着烧。         
4、贮存条件  
   未开启的试剂在2—8℃下贮存，在有效期内可以保持活性。不要使用过期试剂。酶联物、底物溶液、标准品和零标准品必须在2—8℃下贮存。
   微孔反应板必须在2—8℃下贮存。一旦包装袋被打开，必须将它小心地严封起来。拆开包装后，包被的微孔反应板的免疫活性可在约6周内保持稳定，但必须密封在装有干燥剂的袋子里。
5、实验所需器材（但试剂盒不提供）
1）       酶标仪 （450±10nm）（如DRG 公司的酶标仪）
2）       配有一次性使用的10μl、50μl、100μl和1000μl吸嘴的取样枪
3）       吸水纸。
4）       蒸馏水
5）       用于样品稀释的试管（12×75mm）。
6、样品
血清将会在此实验中用到。不要使用易溶血、黄疸血或脂血样品。注意：含叠氮钠的样品不可用于此实验。
1）       样品的采集：血清，静脉穿刺采集全血，待其凝血，在室温下用离心机分离血清。未*凝血前请勿离心，接受了抗凝剂治疗的病人样品可能需要更长的凝血时间。
2）       样品的储存：必须盖住样本并在实验之前于２-８℃下可贮存至５天。样品需要更长的贮存时间，必须在实验之前于-20℃下一次性冻存。融化的样本在检测之前必须要上下倒置几次。
3）       样品的稀释：实验开始前，用零标准品按1：100的比例稀释样品。首先在每一样品试管中加入1ml零标准品，再向相应的试管中加入10μL样品，把所有的试管在旋涡混合器上混合10秒（避免气泡）
4）       在实验中，样品中HPL浓度高于zui高标准品的必须用零标准品进行进一步的稀释。在计算样品浓度时就应当把此稀释因子考虑进去。
7、一般注意事项
1）       所有试剂和样本在使用之前必须平衡至室温。所有试剂必须摇匀但不能起泡沫。
2）       一旦检测开始，所有的操作步骤必须进行到底不能中断。
3）       为了避免交叉放映，每一标准品、质控品和样品的取样都必须使用新的取样吸头。
4）       吸光度值是由孵育的时间和温度所决定的。在实验开始之前，建议准备好所有的药剂旋开盖子。
将所需检测的微孔板条固定在板架上等。这些准备工作将确保每次的加液步骤所需时间相同，没有中断。
5）       按一般的规律，酶免反应的强度与时间和温度成线性比例。
8、实验步骤
8.1操作注意事项
1）       手工加样：建议每次实验做不超过32个检测孔。或者，建议在三分钟内加完所有的标准品、样品和质控品。
2）       自动加样：每次实验可做整板96个检测孔。或者，建议在三分钟内加完所有的标准品、样品和质控品。
3）       所有的标准品、样品和质控品都必须同时做双份，以保证所有的检测条件都一样。每次检测都必须有一条标准曲线。
8.2具体的实验步骤
1）       将所需数量的板条固定到板架上。
2）       将标准品、质控品和已稀释好的样品分别用新的取样吸头取10μL加入到相应的微孔中。
3）       在每一微孔中加入100μL酶联物。
4）       充分混匀10秒，在这个步骤*混匀很重要。
5）       室温孵育30分种。
6）       快速弃取孔内反应物，每孔用400μL蒸馏水洗板5次，在吸水纸上拍干。注意：洗板步骤是否正确操作会明显影响实验的灵敏度和度。
7）       在每一微孔中加入100μl底物。
8）       室温孵育10分种。
9）       加50μl终止液到每个检测孔中终止酶反应。
10）   加终止液后10分钟之内，用酶标仪在450±10nm处测定OD 值。
9、结果计算
1）       计算每个标准品、质控品和病人样本的平均吸光度值。
2）       用吸光度值作为纵坐标（y），浓度值作为横坐标（x），以每个标准品的吸光度值对其相应的浓度值进行标绘，作一条标准曲线。
3）       用每一样品的平均吸光度值在标准曲线上确定其相应的浓度。
4）       自动计算方法：IFU上的结果是用四参数曲线已自动计算得到的。其它的归纳方法可能会得出稍微不同的结果。
5）       样品的浓度可直接从标准曲线上读取。样品中HPL浓度高于zui高标准品的必须用进行进一步的稀释。在计算样品浓度时就应当把此稀释因子考虑进去。
10、期望值
强烈建议每个实验室都建立自己实验室的正常和不正常值。在一次研究中，我们用DRG公司的hPL ELISA进行检测，得到如下结果：

孕周
数值（mg/L）
10-12
0.05-1.00
12-14
0.10-1.7
14-16
0.3-2.8
16-18
0.5-3.5
18-20
0.9-4.0
20-22
1.1-5.0
22-24
1.3-5.8
24-26
1.6-6.7
26-28
2.0-7.7
28-30
2.7-8.5
30-32
3.2-9.5
32-34
3.7-10.1
34-36
4.0-10.7
36-38
4.3-11.2
38-40
4.4-11.7
40-42
4.3-11.6

 

 
产品性能特点
１．              特异性
     用来检测的抗原                                    与HPL等价
人绒毛膜促性腺激素          2000IU/ L              检测不出
催乳激素                                     200μg/L                          检测不出
     甲胎蛋白                   300KIU/L                检测不出
 人生长激素                 100μg/L                检测不出
２．              灵敏度
用本实验方法测得的HPLzui小浓度值为0.043 mg/L。
３．              度
a.            批内差实验度
该度是由在一实验当中对3个不同质控品的重复测定来决定的。批内差异罗列如下：
血清样本
1
2
3
重复次数
18
18
18
HPL平均值（mg/L）
0.66
2.34
6.24
标准差
0.04
0.13
0.42
差异系数（%）
6.06
5.55
6.73
b.            批间差实验度
该度是由在几次实验当中对3个不同质控品的重复测定来决定的。批间差异罗列如下：
血清样本
1
2
3
重复次数
39
24
24
HPL平均值（mg/L）
0.68
2.52
6.87
标准差
0.06
0.18
0.39
差异系数（%）
8.82
7.14
5.67
４．              重复性和线性
a.            重复性
不同的已知HPL水平的病人血清样本混合起来并做双份实验。平均重复率为101.17%。
期待浓度值（mg/L）        测得的浓度值（mg/L）           重复率（%）
 
 
b.            线性
    在线性研究中，用零标准品对两个病人样本进行一系列的稀释。平均重复率为99.7%。
病人样本号     稀释度   期待浓度值（mg/L）  测得的浓度值（mg/L）        重复率（%）

 

５．              Hook’s效应
本实验中，HPL浓度值达到700mg/L仍未产生Hook’s效应。
l        质量控制
良好的实验操作要求每次用校准曲线来做质控品。测定一批具有统计学意义数量的质控品，来建立平均值和正常人的浓度值范围以确保合适的实验操作。不应使用含有叠氮化物的质控品。
l        产品限制
1）       做实验时要对包装内说明书有充分的理解并具有良好的实验操作，这样会获得可靠得和可重复   的结果。
2）       使用本试剂盒得到的结果应该仅作为其它诊断程序的一个帮助和为内科医生提供有用的信息。
3）       冲洗步骤很关键。冲洗不充分会导致度低并使光度值读数偏高。
 
本译文仅供参考，详情请以原文为准。
 
 
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