RE80015 | 标签 | 成分 |
1× | ENZ LYO | 酶,冻干粉,内含苯丙氨酸脱氢酶,辅酶NAD+,缓冲掖,稳定剂 |
1×45ml | ENZDIL | 酶稀释液,即用,内含二乙醇胺,缓冲液,0.01%的NaN3 |
1×55ml | SUBS | 底物,即用,内含四唑盐和柠檬酸盐。 |
1×5 | CAL A-E | 标准品A~E:1;3;6;12;18mg/dl,用2.EWS进行校准。内含人血液,Schleicher & Schuell滤纸编号:903.15血斑纸片。具体浓度请见试剂瓶标签或质控单。 |
1×2 | CONTROL 1+2 | 质控品 1+2 质控品1:1.8-3.0mg/dl 质控品2:4.0-6.0mg/dl 内含人血液,Schleicher & Schuell滤纸编号:903.15血斑纸片。具体浓度及可接受范围请见试剂瓶标签或质控单 |
1×2ml | DYE CONC | 显色储存液,51倍浓缩型,内含酸性黄23(C.I.19140) |
应当从婴儿足跟的中部或内测收集足跟血,注意血液采集的常规注意事项.刺破足跟后,*滴血应当用消毒纱布擦去.将采集卡对准血滴,让足量的血渗入到吸水纸上并充分填满预先印好的圆圈。重复操作,将所需数目的血斑都制备好。将血斑室温下凉干3小时,避免太阳直射。 | ||
注意 | 因为标准品是用Schleicher & Sshcuell No. 903滤纸确定的,所以滤纸的材料会影响实验结果,我们建议您也使用Sshleicher这种纸片。采血时请勿挤压穿刺部位,因为挤压会早成溶血或组织液 稀释血液。不要在采血圈内连续滴血。请勿接触或涂抹血斑。确保血斑样品看上去符合实验要求(例如:血无涂抹,无凝块,血斑上无指纹)。 | |
注意 | 样品应当在婴儿出生后第三天到第五天的时间内采集。(出生后72到120小时内)。出生不到72小时就采集的样品可能产生假阴性结果。 | |
储存 | 2-8℃ | 避免热源和太阳直射 |
稳定性 | 6个月 |
注意 | 配置好的酶储存液在2-8℃可稳定存放5天。准备实验实际所需要的酶反应液即可。 |
| 在每支冻干的酶试剂瓶内加入12ml双蒸水,盖好试剂瓶,轻轻混合以使其充分溶解,混合2分钟,混合时避免起泡。 |
注意 | 如果您使用了好几支酶储存液,我们建议您将各管稀释液混合并确定混合液的浓度.重新配置好的酶储存液在18-25℃可稳定存放8小时,储存于2-8℃的环境下也不能延长它的有效期 | ||||||||||||||||||||||||
| 酶溶液的建议配制量:
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| 按照上述表格用稀释液稀释酶储存液,充分混合2min,混合时避免起泡 |
| 用3%三氯乙酸按1:51的比例稀释显色储存液(如:加2ml浓缩型的染色储存液到100ml3%的三氯乙酸中。配置好的三氯乙酸在18-25℃的环境下有效期内稳定。 |
| 用打孔器打下标准品、质控品和样品血斑纸片(直径5mm),分别放到相应的聚苯乙烯试管中,标上标签 |
| 在每一试管中加入100ul 3%三氯乙酸,确保每一纸片都被溶液浸没。 |
| 振荡器(300-500rpm,振幅:1.5-3mm)上室温(18-25℃)温育30-60分钟。 |
1 | 在微孔板的每一微孔中加入25ul 0.5M的NaOH溶液。 |
2 | 将75ul标准品、质控品和血斑样品洗提液分别加入到相应的微孔中,稍振板以便混合均匀 |
3 | 在每一微孔中加入100ul临时配置好的酶溶液 |
4 | 室温(18-25℃)下温育30分钟 |
5 | 在每一微孔中加入100ul底物溶液,振荡器(300-500rpm,振幅:1.5-3mm)上振荡3分钟 |
6 | 加入底物后3-5分钟内570nm处读取OD值 |
标准品 | 苯丙氨酸(mg/dl) | 平均OD值 |
A | 0.61 | 0.039 |
B | 2.61 | 0.074 |
C | 5.81 | 0.108 |
D | 11.61 | 0.186 |
E | 17.61 | 0.283 |
血红蛋白 | 5mg/dl |
胆红素 | 500mg/dl |
甘油三酯 | 3000mg/dl |
分析特异性(交叉反应) | 用有交叉反应的典型物质检测,没发现有交叉反应 | ||
灵敏度分析(检测极限) | 1.55mg/dl | 灵敏度分析:20%;y=26.33×-0.6304 R2=0.82 | |
精密度 | 范围(mg/dl) | CV(%) | |
板内差异 | 2.68-9.6 | 5.8-11.0 | |
板间差异 | 2.79-9.36 | 6.4-15.1 | |
线形度 | 样品中苯丙氨酸浓度高于zui高标准品的应当用其它参考方法进行证实。样本稀释是不可能的,因为稀释用无苯丙氨酸血不存在。而无苯丙氨酸的血液浸膏剂做稀释液可能会产生基质效应。 | ||
重现性 | 平均值(U/ml) | 范围(%) | 加入已知浓度样品后的重现性% |
101 | 91-127 | ||
与其它实验方法比较 | IBL检测=0.88×其他检测-0.21 | r=0.95;n=98 |
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