测试前准备  

在进行测定之前，请仔细阅读测试方案。结果可靠性取决于是否严格遵守所述的测试协议。以下测试程序仅对手动程序进行了验证。如果在ELISA自动系统上进行测试，我们建议将洗涤步骤从3次升到5次，洗涤液体积从300μl增加到350μl，以避免洗涤步骤影响结果。在开始测定之前，应在试剂盒中提供的结果表中仔细确定所有标本和对照的分布和排版。选择所需数量的微量滴定条或孔，并将其插入支架。  

请至少安排以下板孔  

1孔（如A1）：空白对照  

1孔（如B1）：阴性质控  

1孔（如C1+D1）：临界质控  

1孔（如E1）：阳性质控  

如有必要，建议质控品和样本做复孔测试  

按照给定的顺序执行所有测定步骤，并且在步骤之间没有任何明显的延迟。应使用干净的一次性吸头来分配每个质控和样品。将培养箱调整至37°C±1°C。  

1.将100μl质控品和稀释样品加入到各孔中。保留A1为基底空白。  

2.使用试剂盒中提供的盖板膜盖板。  

3.在37±1℃下孵育1小时±5分钟。  

4.孵育完成后，移去铝箔盖板膜，弃去孔中的内容物，用300μl洗涤液洗涤各孔三次。避免溶液溢出反应孔。每个洗涤周期之间的浸泡时间应为>5秒。最后，在下一步之前，在吸水纸上拍干板孔中液体。  

注意：洗涤至关重要！洗涤不足导致精度差和吸光度值错误升高。  

5.将100μl酶结合物加入到除空白孔（例如A1）外的所有孔中。盖板。  

6.室温（20〜25℃）孵育30分钟。避免暴露在阳光下。  

7.重复步骤4。  

8.每孔加入100μlTMB底物溶液。  

9.在黑暗中室温（20〜25℃）孵育15分钟。  

10.以与TMB底物溶液相同的顺序和相同的速率将100μl终止液加入到所有孔中。