褪黑素（MT）检测基于竞争性酶联免疫吸附测定技术。抗体被预先包被在96孔板上。将标准品、测试样品和生物素结合试剂添加到孔中并孵育。生物素标记的MT与未标记的MT之间发生竞争控制反应。然后加入HRP结合试剂，并孵育整个培养皿。
在每个阶段使用洗涤缓冲液去除未结合的结合物。TMB底物用于定量HRP酶促反应。加入TMB基质后，只有含有足够MT的孔才会产生蓝色产物，然后在加入酸性停止溶液后变为黄色。黄色的强度与镀液中MT的结合量成反比。用分光光度法在450nm的微孔板读卡器中测量OD，由此可计算MT的浓度。
褪黑素（Melatonin，MT）是一种主要由松果体在夜间释放的激素，长期以来一直与睡眠－觉醒周期的控制有关。褪黑素属于吲哚杂环类化合物，又称为松果体素、褪黑激素、褪黑色素。
褪黑素合成后，储存在松果体内，交感神经兴奋支配松果体细胞释放褪黑素。褪黑素的分泌具有明显的昼夜节律，白天分泌受控制，晚上分泌活跃。MT由松果腺分泌，主要与生物钟的调节、抗氧化、抗衰老、调节胃肠运动功能，并参与肝性脑病的发病、调节情绪、生育及多种内分泌功能。
此分析具有竞争性，因此样品中的MT浓度与测量的吸光度呈负相关。用标准浓度（y轴）和测量的平均吸光度（x轴）的对数创建一个图表。通过标准点应用拟合趋势线。样品的MT浓度可以从标准曲线中插值。
