新喋呤 ELISA 简明操作说明
（德国IBL原装）RE:59321
新喋呤生物合成与细胞免疫系统的活性关系密切，据报道在病毒感染病人新喋呤升高，认为升高源于直接防御病毒感染细胞的免疫应答。已证实抗原刺激人外周血单核细胞可引起新喋呤释放入细胞培养液中，人巨噬细胞在体外培养时受γ-干扰素刺激产生新喋呤。人体液中新喋呤水平的测定为细胞介导免疫的相关疾病监测提供了一种有用和创新的工具。许多传染病，新喋呤水平升高先于临床表现和血清变化。通常样本不会进行所有可能的传染病测定，因此为了降低输血传染的危险性，对献血员样本进行新喋呤测定是有意义的。
测定新喋呤的其它诊断应用有：
l 重复损伤的ICU病人
l 用于预测HIV感染和恶性疾病
l 移植手术后病人并发症的早期预测
l 自身免疫性疾病、疾病活动的指征
l 病毒感染的诊断
l 急性病毒和细菌感染的鉴别诊断
l 慢性感染复发和免疫刺激治疗的监测
实验原理
本试验应用竞争ELISA原理
一． 试剂准备（以32个样本测试配制）
1． 洗涤缓冲液：加15ml浓缩液至干净的容器中加双蒸水至300ml（1：20稀释）2—8℃贮存。
2． 酶联结物：25ul浓缩液加入5ml实验缓冲液（1：201稀释），2—8℃zui多贮存24小时。
3． TMB底物液：用9ml TMB底物缓冲液稀释300ul浓缩液。（1：31稀释）2—8℃可保存48小时。
二． 样本收集及贮存
1． 样本、血清，EDTA 抗凝血浆
2． 贮存 2--8℃24小时
-20℃ 长期贮存，避光保存避免反复冻溶。
三． 实验步骤
整个实验过程应避免阳光直射，将试剂盒平衡至室温。
1． 加10 ul标准品、样本或质控于相应反应孔中。
2． 加50ul新喋呤抗血清于各孔中。
3． 加100ul酶联物。
4． 用封板纸封板后，室温（20-25℃）振荡（500转/分），90分钟。
5． 弃去孔中液体，洗板3次。
6． 加200ul TMB底物液于各孔中。
7． 室温（20-25℃）避光放置10分钟。
8． 以加TMB 底物液的顺序加100ul终止液于各孔中。
9． 混匀后15分钟内450 nm读吸光度。
注意：洗涤过程对实验结果是重要的。
从标准曲线上可以直接查到样本的结果。样本OD值高于zui大的标准品。应将样本用实验缓冲液稀释后检测，结果应乘以稀释倍数。
四． 期望值
血清正常值 小于10nmol/L（2.5ng/ml）
本译文仅供参考，详情请以原文为准。
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